酵母RNA的提?。簩嶒炘?/p>
核酸(RNA)是一類不穩定的生物大分子,在制備過程中很容易發生降解。因此,要使制得的核酸盡可能保持其在生物體內的天然狀態,制備核酸必須采取溫和的條件,例如避免過酸過堿,避免劇烈的攪拌,防止核酸降解酶類的作用。
由于RNA種類較多,所以制備方法也各異。工業上制備RNA一般選用成本較低、適宜于大規模操作的稀堿法和濃鹽法。稀堿法是用1%NaOH溶液,將細胞壁溶解,用酸中和,升高溫度使蛋白質變性,將蛋白質與核酸分離,然后除去菌體,將pH調至RNA的等電點(pH=2.5),使RNA沉淀出來。稀堿法的優點是抽提時間短,但RNA在此條件下不穩定,容易分解。濃鹽法是用10%NaCl溶液改變細胞膜的通透性,使核酸從細胞內釋放出來,該法提取RNA時要注意掌握溫度,避免在20~70℃之間停留時間過長,因為這是磷酸二酯酶和磷酸單酯酶作用活躍的溫度范圍,會使RNA因降解而降低提取率。利用加熱至90~100℃,使蛋白質變性,破壞該酶類,有利于RNA的提取。
若要提取接近天然狀態RNA,可采用苯酚法或氯仿-異戊醇法去蛋白,然后用乙醇沉淀RNA,離心收集。
本實驗采用濃鹽法(10%NaCl)。