【實驗原理】

細胞培養是模擬機體內生理條件，在人工條件下培養離體細胞，使其生存、生長、繁殖和傳代?？蛇M行細胞生命過程、細胞癌變等問題的研究，已廣泛地應用于分子生物學、遺傳學、免疫學、腫瘤學、細胞工程等領域。原代培養是直接由體內取出組織或細胞進行培養。由于原代培養的細胞離體時間短，性狀與體內更相似，適用于研究，也為以后進行傳代培養創造條件。原代培養可以分為組織塊培養法和消化法。

【實驗器材】

1.實驗材料

小鼠、小牛血清、DMEM、胰酶、PBS緩沖液、醫用酒精。

2.實驗儀器

CO?_2?培養箱、倒置顯微鏡、超凈工作臺、高壓滅菌鍋、水浴箱、離心機、飯盒、紗布、手術剪、眼科剪、眼科鑷、燒杯、培養皿、離心管、培養瓶、青霉素小瓶、酒精噴壺、微量移樣器。

【實驗步驟】

1.實驗準備

打開超凈工作臺電源開關，用醫用酒精擦拭臺面，擺放好實驗用品，打開紫外滅菌燈，30分鐘后關閉紫外燈，開啟日光燈同時開啟風機。

2.實驗過程

（1）頸椎脫臼法處死小鼠，置75%酒精中浸泡1～2分鐘，移入超凈工作臺內。

（2）用手術剪剪開腹腔，取出肝臟，置于盛有PBS緩沖液的培養皿中，清洗表面的血液等雜質。

（3）清除肝臟被膜、附著的脂肪及纖維結締組織，用PBS緩沖液反復沖洗3遍。

（4）將肝組織轉移到另一個盛有PBS緩沖液的培養皿中，剪成0.5～1mm?^3?小塊，同時用眼科鑷將彼此分開。

（5）加入5～6倍體積0.25%胰酶，37℃孵育20分鐘，之后加入含血清的DMEM以中止胰酶的消化作用。

（6）將消化好的肝組織塊貼于培養皿中，加2～3mL培養液置37℃、5%CO?_2?條件下培養。

【實驗預期結果及分析】

組織塊貼壁良好，24～48小時即可見組織塊邊緣有少量細胞長出。

【要點提示及注意事項】

1.實驗過程中要嚴格無菌操作，防止污染。

2.加入胰酶消化時要注意消化時間。

3.組織塊不能太大，否則影響貼壁。